實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團(tuán)，利用熒光信號來實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板濃度進(jìn)行定量分析。 二手實(shí)時熒光定量PCR儀 一般包括：實(shí)時熒光定量PCR儀+開機(jī)檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件。京科瑞達(dá)二手儀器告訴你二手實(shí)時熒光定量PCR選擇指南。

儀器的性能需要考量：線性范圍、檢測靈敏度、檢測精密度、反應(yīng)時間、檢測通道數(shù)、檢測樣本量等。而二手實(shí)時熒光定量PCR儀的硬件配置主要看：溫控模塊、光路檢測模塊。

溫度控制模塊

溫度控制是qPCR技術(shù)的核心所在，為了實(shí)現(xiàn)高準(zhǔn)確度，實(shí)時PCR熱系統(tǒng)應(yīng)確保整個加熱塊的溫度均勻性，確保能夠以相同速率的反應(yīng)處理所有的樣本。

01 溫控速率

升降溫速度快的是好設(shè)備，但是單一模塊升降溫速度快并不代表樣本升降溫速度也快，所以還要看樣本的升降溫速度是否也快，注意zui大升降溫速度≠平均升降溫速度。

02 溫控精度

控溫模塊中銀質(zhì)半導(dǎo)體控溫模塊目前是比較好的，因?yàn)殂y是金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少。

金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表：銀 ＞ 銅＞金＞ 鋁＞ 鐵＞ 錫＞ 鉛 。

溫度準(zhǔn)確度和溫度均一性越小越好。

光學(xué)檢測模塊

01 光源

光強(qiáng)比較：光強(qiáng)比較：髙強(qiáng)度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED

白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到更多的熒光信號，是專業(yè)光源領(lǐng)域的新技術(shù)代表。

壽命比較：壽命比較：髙強(qiáng)度白光LED = 單色LED  ＞鹵鎢燈

白光LED的壽命長達(dá)10000小時以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需更換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次，費(fèi)時費(fèi)力，南方更是不足一年就要更換一次。

02 檢測器

熒光定量PCR靈敏度：冷CCD＞CCD＞光電倍增管 CPM  ＞光電二極管

CCD作為熒光信號的接受器，其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩(wěn)定性。10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別，在專業(yè)光學(xué)領(lǐng)域，冷CCD的造價成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進(jìn)行光信號捕捉，能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個拷貝數(shù)。

03 光路傳導(dǎo)

光路設(shè)計(jì)應(yīng)盡可能有效消除邊緣效應(yīng)，光路設(shè)計(jì)是否有效消除孔間邊緣效應(yīng)，可以自行進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)。